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    細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和過(guò)程控制,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)

    2021-03-02 18:32:00


    細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和過(guò)程控制,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)

    1細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和過(guò)程控制
     

    細(xì)胞培養(yǎng)基作為生物制品生產(chǎn)的重要原材料之一,其質(zhì)量對(duì)生物制品有重要的影響。細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)工藝和細(xì)胞培養(yǎng)基的原材料選用、生產(chǎn)過(guò)程及檢驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)基的產(chǎn)品質(zhì)量具有直接影響。其中原材料的成份及其質(zhì)量直接決定了細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的質(zhì)量及安全性,選擇合適的物料是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)基功能過(guò)程中需要解決的基礎(chǔ)問(wèn)題。生產(chǎn)工藝的選擇(如原料的研碎、混合技術(shù)等)及生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制等直接影響產(chǎn)品的溶解性、批生產(chǎn)量及批次間差異,進(jìn)而影響產(chǎn)品的質(zhì)量。
     

    cGMP稽查員在對(duì)國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行cGMP審計(jì)時(shí)指出,細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)工藝及設(shè)備應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,原材料必須做鑒別試驗(yàn),記錄應(yīng)真實(shí)反映生產(chǎn)過(guò)程的實(shí)際情況,生產(chǎn)過(guò)程偏差處理應(yīng)包括對(duì)出現(xiàn)偏差之前涉及到的批次均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查等等。這些要求是基于FDA對(duì)生物制藥用原料的質(zhì)量要求方面提出,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國(guó)內(nèi)對(duì)藥用原料的要求。隨著對(duì)人用和動(dòng)物保健用生物制品安全性要求的提高,嚴(yán)格執(zhí)行GMP規(guī)范進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)是國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)發(fā)展的必然趨勢(shì)。

     

    1.1細(xì)胞培養(yǎng)基的原料選擇及質(zhì)量控制
     

    1.1.1原材料的選擇

    由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品屬于藥用原料,《哺乳類動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的微生物限度、內(nèi)毒素含量進(jìn)行了限定,所以細(xì)胞培養(yǎng)基所用原料宜采用注射級(jí)、藥用級(jí)原料。對(duì)于部份沒(méi)有注射級(jí)和藥用級(jí)的原料,細(xì)胞培養(yǎng)基制造者針對(duì)自身產(chǎn)品質(zhì)量要求,制定一些重要指標(biāo)(微生物限度、內(nèi)毒素、重金屬等)進(jìn)行原材料的質(zhì)量控制。
     

    1.1.2原材料的質(zhì)量控制

    細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)建立完善的原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),對(duì)于原材料的來(lái)源、檢驗(yàn)、使用、及銷毀等有明確的可追溯記錄。在質(zhì)量控制過(guò)程中,藥用級(jí)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)參考中國(guó)藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),對(duì)于非藥用級(jí)原材料應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝需要與供應(yīng)商一起共同確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括如下內(nèi)容:

    ¨      指定的物料名稱和企業(yè)內(nèi)部使用的物料代碼

    ¨      藥典專論的名稱(如有)

    ¨      經(jīng)批準(zhǔn)的供應(yīng)商以及原始生產(chǎn)商

    ¨      印刷包裝材料的樣張

    ¨      物料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)及其編號(hào)

    ¨      取樣、檢驗(yàn)方法或相關(guān)規(guī)程編號(hào)

    ¨      定性和定量的限度要求

    ¨      貯存條件和注意事項(xiàng)

    ¨      復(fù)驗(yàn)前的最長(zhǎng)貯存期
     

    原材料的質(zhì)量檢測(cè)主要從材料、人員、方法三個(gè)方面進(jìn)行控制:

    1)    具有必要的檢測(cè)試劑、設(shè)備和設(shè)施,如鱟試劑、分析天平、潔凈操作室或取樣柜。

    2)    擁有相應(yīng)操作資質(zhì)和能力的檢驗(yàn)人員,如相應(yīng)檢測(cè)人員應(yīng)具備化驗(yàn)員資質(zhì)并經(jīng)過(guò)全面的技能培訓(xùn)。

     選擇具有法律效力的檢測(cè)方法以及對(duì)應(yīng)的操作規(guī)范,在檢測(cè)方法的選擇方面藥用原料應(yīng)優(yōu)先采用藥典方法,非藥用原料應(yīng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證有效的檢測(cè)方法,在確定檢測(cè)方法后應(yīng)制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)操作文件,用于規(guī)范試驗(yàn)操作。
     

    應(yīng)嚴(yán)格控制細(xì)胞培養(yǎng)基的原材料質(zhì)量管理,并建立相應(yīng)完善的原材料質(zhì)量管理文件體系。原材料的質(zhì)量管理方面,應(yīng)明確規(guī)定責(zé)任范圍和流程方法,它們是保證原材料質(zhì)量的基礎(chǔ)。原材料質(zhì)量管理文件體系內(nèi)容通常包括兩個(gè)方面,一方面是明確原材料質(zhì)量責(zé)任應(yīng)歸屬的部門及人員,以實(shí)現(xiàn)分工明確;另一方面是明確原材料的取樣、檢驗(yàn)、放行、判定不合格、異常情況、偏差、驗(yàn)證等事務(wù)具體流程,確保流程正確,方法無(wú)誤,為質(zhì)量控制提供依據(jù)。

     

    1.2細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)工藝

     

           傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)工藝即生產(chǎn)過(guò)程通常分為物料配比、物料干燥、物料研碎、物料混合、物料包裝、成品的檢驗(yàn)等6個(gè)階段,下面結(jié)合過(guò)程中的質(zhì)量控制對(duì)此工藝進(jìn)行介紹:

     

    1.2.1物料配比

     

          物料配比是根據(jù)配方要求將各種原料按比例配制的過(guò)程。配制需嚴(yán)格執(zhí)行配方,才能保證細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品功能的實(shí)現(xiàn)及降低批間差,而實(shí)現(xiàn)低誤差的物料配比過(guò)程需從以下幾個(gè)方面進(jìn)行控制:

     

    1)   提供與生產(chǎn)工藝規(guī)程匹配且經(jīng)過(guò)審核的、有效力的物料配方,生產(chǎn)部門根據(jù)配方制定配比操作記錄,經(jīng)質(zhì)量管理部門審核后,方可投入生產(chǎn)作業(yè)使用;

     

    2)   具有詳細(xì)明確的經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的設(shè)備、設(shè)施、工序操作規(guī)程以及相關(guān)管理規(guī)程,如通過(guò)編制設(shè)備、設(shè)施的驗(yàn)證、使用、維護(hù)、維修操作規(guī)程來(lái)明確操作方法和流程,通過(guò)編制相應(yīng)管理文件,來(lái)明確人員責(zé)任;

     

    3)   具有足夠的在校驗(yàn)有效期內(nèi)的精確度合理的計(jì)量器具,及與產(chǎn)品質(zhì)量要求相匹配的生產(chǎn)環(huán)境設(shè)施,如為降低細(xì)胞培養(yǎng)基微生物、內(nèi)毒素限度使用潔凈廠房進(jìn)行生產(chǎn)等;

     

    4)   足夠的經(jīng)過(guò)合理培訓(xùn)具有上崗資質(zhì)的操作人員和設(shè)備管理人員(操作員上崗證、計(jì)量員證),各崗位操作人員配備足夠,能夠確保操作過(guò)程實(shí)現(xiàn)雙人操作雙人復(fù)核;

     

    5)   配備足夠的基層管理人員以及現(xiàn)場(chǎng)QA,起到指導(dǎo)和監(jiān)督作用。

     

    1.2.2物料干燥

     

           基于細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)豐富,且不是無(wú)菌制劑的特性,為避免微生物滋生破壞細(xì)胞培養(yǎng)基成份,需控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分含量,依據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求,其干燥減重質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)低于5.0%,而原料干燥是控制其含水量的最重要環(huán)節(jié)。

     

           目前常用的干燥方法有常壓干燥和冷凍干燥。常壓干燥包括烘干干燥、鼓式干燥、帶式干燥,由于國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家普遍采用球磨缸進(jìn)行生產(chǎn),由于各缸獨(dú)立,無(wú)法使用鼓式干燥、帶式干燥的方式進(jìn)行連續(xù)烘干作業(yè),所以普遍采用烘干干燥的方式按批進(jìn)行物料干燥。冷凍干燥主要用于不能耐受高溫的貴細(xì)物料的干燥處理。

     

    1.2.3物料研磨

     

           細(xì)胞培養(yǎng)基顆粒越細(xì),同質(zhì)條件下比表面積越大,其溶解性越好,而其成品細(xì)度是由物料的研磨過(guò)程直接決定。對(duì)于物料的研磨,傳統(tǒng)普遍采用藥用球磨機(jī),其主要優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便、易于清潔及使物料混合作用(能夠?qū)崿F(xiàn)缸體內(nèi)各種成份的均勻分布)。球磨缸內(nèi)的研磨球材質(zhì)通常有陶瓷、瑪瑙、不銹鋼(304或316L)。但是球磨機(jī)也存在批量小、噪音大、難以控制溫度、粉狀物料不易取出且取料過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量粉塵等缺點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)一些細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)在球磨缸取料工序裝備了全密閉自動(dòng)取粉裝置,較好的解決了粉塵污染問(wèn)題,也進(jìn)一步降低了由于物料的裸露可能帶來(lái)的引入異物及物料受潮的風(fēng)險(xiǎn)。

     

    1.2.4物料混合

     

           混合設(shè)備首先必須具備能夠?qū)崿F(xiàn)物料均勻性的功能。在上述物料研磨過(guò)程中,可能存在投料微量誤差、過(guò)程參數(shù)細(xì)微差異以及其他不可控因素,上述因素的累積會(huì)導(dǎo)致不同研磨單元內(nèi)物料可能出現(xiàn)一定的差異(外觀、理化性質(zhì)、培養(yǎng)性能),這些差異將直接影響產(chǎn)品的使用,造成使用者生產(chǎn)效率及產(chǎn)品的批間差異。根據(jù)哺乳類細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)于“批”的定義,即同一臺(tái)混合設(shè)備一次混合量所生產(chǎn)的均質(zhì)產(chǎn)品為一批,物料經(jīng)研磨單元研磨以后必須進(jìn)行總混和均勻后才能稱為一批成品進(jìn)行包裝。目前常用的物料混合設(shè)備以摻和機(jī)、雙錐混合機(jī)較為常見(jiàn)。

     

    1.2.5物料包裝

     

           物料的包裝分為內(nèi)包裝和外包裝,主要為了實(shí)現(xiàn)如下功能:

     

    1)   阻隔性功能:即密閉保存(避光、防潮、防污染、防氧化等),是指直接與產(chǎn)品接觸的內(nèi)包裝,在選擇內(nèi)包裝材料時(shí)其阻隔性是關(guān)鍵,高阻隔性包裝薄膜所采用的阻隔性樹(shù)脂主要有EVOH、PA、PET、PVDC、PC、MXD6和聚丙烯腈共聚物,其中PVDC是開(kāi)發(fā)較早的阻隔性能優(yōu)異的材料,而包裝用薄膜材料結(jié)構(gòu)包括:紙/塑料、塑料/鍍鋁塑料、紙/鋁箔/塑料和塑料/鋁箔/塑料等幾種【11】;

     

    2)   產(chǎn)品信息的提供:產(chǎn)品外包裝上應(yīng)明確標(biāo)識(shí)品名、批號(hào)、代碼、生產(chǎn)日期、有效期、使用方法等基礎(chǔ)信息,并隨附企業(yè)質(zhì)量監(jiān)管部門下發(fā)的產(chǎn)品合格證以及質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告等質(zhì)量證明文件;

     

    3)   易于運(yùn)輸?shù)姆雷o(hù):確保外包裝物能夠抵御運(yùn)輸過(guò)程中裝卸產(chǎn)生撞擊的沖擊,并要具備一定的堆疊強(qiáng)度,對(duì)于需要遠(yuǎn)途運(yùn)輸?shù)牟荒苣褪芨邷氐某善窇?yīng)做好低溫保護(hù)工作(填充保溫材料,包裝箱內(nèi)混裝冰袋、干冰等蓄冷物)。

     

    1.2.6成品的檢驗(yàn)

     

    細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品生產(chǎn)完畢后,由質(zhì)量檢測(cè)部門對(duì)該批次產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè),在這一周期內(nèi),成品處于待驗(yàn)狀態(tài),儲(chǔ)存條件應(yīng)與合格成品一致,應(yīng)專區(qū)存放專人管理,避免混淆和遺漏,在收到質(zhì)量檢測(cè)部門檢測(cè)合格予以放行的通知后,轉(zhuǎn)交成品庫(kù),移入合格品區(qū)備售。

     

    1.2.7細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的新工藝

     

    采用上述傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝(通常稱作球磨工藝)生產(chǎn)的產(chǎn)品均一性較好,物化性能穩(wěn)定以及細(xì)胞培養(yǎng)效果較好,但是存在批量小、研磨過(guò)程中的散熱難以控制、噪音及粉塵污染較大等缺點(diǎn)。2005年新開(kāi)發(fā)了一種連續(xù)生產(chǎn)的針式研磨系統(tǒng)(pin mill),集“物料混合-針式研磨-研磨后混合”一體,用于工業(yè)化生產(chǎn)干粉細(xì)胞培養(yǎng)基,可以用來(lái)生產(chǎn)從10kg至4000kg不等批量的干粉細(xì)胞培養(yǎng)基。

     

    Pin mill研磨系統(tǒng)是一種高速?zèng)_擊研磨系統(tǒng),包括一個(gè)進(jìn)料口、兩個(gè)同軸帶有研磨針的轉(zhuǎn)盤以及一個(gè)出料口。當(dāng)原料通過(guò)進(jìn)料口投入研磨器后到達(dá)轉(zhuǎn)盤中央,在轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)離心力的推動(dòng)下往徑向外側(cè)運(yùn)動(dòng)同時(shí)被相互咬合且相對(duì)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的研磨針研細(xì)。物料在進(jìn)入針式研磨腔前和完成研磨離開(kāi)研磨設(shè)備后都使用混合機(jī)進(jìn)行了混合,以確保進(jìn)入研磨器和最終產(chǎn)品的成份均勻性,其生產(chǎn)工藝流程見(jiàn)下圖1-1。


     

    圖1-1 pin mill生產(chǎn)干粉細(xì)胞培養(yǎng)基工藝流程圖

     

    與傳統(tǒng)的球磨生產(chǎn)工藝相比,pin mill 生產(chǎn)系統(tǒng)研磨的顆粒更細(xì),批次控制范圍大且靈活(0.5~4000kg),在研磨及研磨后顆粒輸送的過(guò)程中,采用氮?dú)饪刂茩C(jī)體的溫度,使研磨機(jī)的溫度保持在40℃以下,并且避免了粉塵污染、交叉污染等。該系統(tǒng)機(jī)體的拆分、組裝及清潔也較為簡(jiǎn)單,適合cGMP生產(chǎn)。

     

    關(guān)于使用pin mill 系統(tǒng)生產(chǎn)的DPM性能,如生產(chǎn)過(guò)程中的成份組成均質(zhì)性、生產(chǎn)的產(chǎn)品性能及是否適合細(xì)胞培養(yǎng)和生物制品生產(chǎn)等,有詳細(xì)的驗(yàn)證研究,結(jié)果顯示,pin mill生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品均勻分布性滿足標(biāo)準(zhǔn),并且均勻性與成份以及批量大小無(wú)關(guān);生產(chǎn)的產(chǎn)品諸如溶解性、pH、滲透壓等理化性質(zhì)、細(xì)胞培養(yǎng)方面及生物制品生產(chǎn)與球磨生產(chǎn)工藝相同。

     



    細(xì)胞培養(yǎng)基的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法
    2.1哺乳類動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)介紹

    國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基使用者一般采用經(jīng)驗(yàn)法或?qū)嶒?yàn)法選擇培養(yǎng)基,但是這些經(jīng)驗(yàn)或是來(lái)自于以前的傳統(tǒng)方法、或是通過(guò)簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),因其影響因素較多,在判定的過(guò)程中,不同的使用者判定的標(biāo)準(zhǔn)也不相同,進(jìn)而可能影響對(duì)產(chǎn)品的正確選擇。因此,采用統(tǒng)一的質(zhì)量管理規(guī)范是控制產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)基本前提。

     

    2007年10月1日國(guó)家發(fā)展和改革委員會(huì)批準(zhǔn)的《哺乳類動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基》(HG/T3935-2007)國(guó)家化工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)正式實(shí)施,為國(guó)內(nèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品質(zhì)量及檢測(cè)方法提供了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測(cè)項(xiàng)目和方法做出了明確的規(guī)定。


    2.2細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測(cè)方法
    2.2.1澄清度檢查法

    該方法依據(jù)中國(guó)藥典2010版二部附錄IX B 澄清度檢查法制定。澄清度是檢查藥品溶液的渾濁程度,即濁度,藥品溶液中如存在細(xì)微顆粒,當(dāng)直射光通過(guò)溶液時(shí),可產(chǎn)生光散射和光吸收的現(xiàn)象,致使溶液微顯渾濁,所以澄清度可在一定程度上反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平。水是培養(yǎng)基的溶劑,細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成份只有完全溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取,細(xì)胞才能生長(zhǎng)增殖,因此培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。通過(guò)對(duì)水溶解后的培養(yǎng)基的澄清度檢查,判斷細(xì)胞培養(yǎng)基的溶解性。此法是用規(guī)定級(jí)號(hào)的濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液比較,以判定細(xì)胞培養(yǎng)液的澄清度或其渾濁程度。
    2.2.2 pH 值測(cè)定法

    各種細(xì)胞的正常功能及一切生物化學(xué)反應(yīng),都是在適當(dāng)和穩(wěn)定的酸堿環(huán)境下進(jìn)行的,因此細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值是細(xì)胞生長(zhǎng)的重要參數(shù),pH值偏低或偏高都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。該法依據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅵ H pH值的測(cè)定法進(jìn)行。由于各酸度計(jì)的精度與操作方法有所不同,應(yīng)嚴(yán)格按各儀器說(shuō)明書(shū)與注意事項(xiàng)進(jìn)行操作,并在使用之前注意校正。

    在工業(yè)化使用時(shí),由于傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基中含有pH指示劑如酚紅等,通常依據(jù)“眼睛”觀察培養(yǎng)液顏色來(lái)判定pH,或是簡(jiǎn)單的使用pH試紙測(cè)定,但是上述方法存在較大的主觀因素,影響正確判定,并且在配制的過(guò)程中,不同區(qū)域還可能存在一定的水質(zhì)區(qū)別等,采用pH儀器檢測(cè)可以消除人的主觀因素,準(zhǔn)確性高。此外,在檢測(cè)過(guò)程中,添加碳酸氫鈉后的培養(yǎng)基在測(cè)定的過(guò)程中,暴露在空氣中的時(shí)間也會(huì)對(duì)所測(cè)pH的準(zhǔn)確性有一定的影響。
    2.2.3干燥減量測(cè)定方法

    細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性,在空氣中放置時(shí)水份會(huì)很快升高,干燥減量表示產(chǎn)品中的含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑,其豐富的營(yíng)養(yǎng)成份有利于微生物生長(zhǎng),保持培養(yǎng)基中的低水份含量可以防止微生物的繁殖。檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中水份的含量采用的方法是干燥減量法。該測(cè)定方法是依據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部附錄Ⅷ L 干燥失重測(cè)定法制定,具體是指產(chǎn)品在規(guī)定條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要是水分、結(jié)晶水及其他揮發(fā)性物質(zhì)等。由減失的重量和取樣量計(jì)算供試品的干燥失重。
    2.2.4滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)

    通常動(dòng)物細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,借助K+、Na+維持滲透平衡。雖然大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)具有有一定的耐受性,但是培養(yǎng)液滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)過(guò)高容易使細(xì)胞脫水萎縮,培養(yǎng)液滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)過(guò)低容易使細(xì)胞膨脹破裂,控制培養(yǎng)基的滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)范圍對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)具有重要的作用。檢測(cè)通常采用冰點(diǎn)滲透壓儀進(jìn)行,當(dāng)供試品溶液的毫滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)摩爾濃度太大或大于儀器的測(cè)定范圍時(shí),用適宜的溶劑稀釋至可測(cè)定的毫滲透壓(摩爾濃度滲透壓,摩爾滲透壓)摩爾濃度范圍。

    2.2.5細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法

    細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌內(nèi)毒素過(guò)高,對(duì)生物制品的質(zhì)量如純度、引起副反應(yīng)等方面有影響,而且會(huì)降低生物制品的產(chǎn)率。

    細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法通常利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素,以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。其檢查包括凝膠法和光度測(cè)定法,后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測(cè)時(shí),可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。通常當(dāng)測(cè)的結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí),以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。
    2.2.6微生物限度

    細(xì)胞培養(yǎng)基不是無(wú)菌產(chǎn)品,其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖,導(dǎo)致培養(yǎng)基變質(zhì)失效?刂萍(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌,是延長(zhǎng)培養(yǎng)基有效期的方法之一,也是對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品、原料、輔料、設(shè)備器具、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)之一,對(duì)其的檢測(cè)是非常必要的。檢測(cè)方法依據(jù)中國(guó)藥典2010年版附錄Ⅺ J 微生物限度檢查法進(jìn)行,檢查項(xiàng)目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。
    2.2.7細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)

    細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制作用,因此,細(xì)胞培養(yǎng)液除滿足細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)要求外,還必須使其生存環(huán)境接近活體的環(huán)境。其中培養(yǎng)液及外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)基的功能就是滿足細(xì)胞體外生長(zhǎng)增殖需求,因此細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的一個(gè)直觀表述,是必檢項(xiàng)目,這也是一個(gè)產(chǎn)品性能特性表述的要求。

    細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)方法是:細(xì)胞在37℃恒溫條件下,在含體積分?jǐn)?shù)為3%~10%小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中生長(zhǎng)72h,觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);細(xì)胞生長(zhǎng)72h后,更換不含小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)48h,觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。培養(yǎng)過(guò)程中加血清培養(yǎng)主要檢測(cè)培養(yǎng)基的培養(yǎng)質(zhì)量,不加血清培養(yǎng)主要檢測(cè)培養(yǎng)基的有無(wú)毒害物質(zhì)。

    細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)不但在使用一個(gè)新的產(chǎn)品時(shí)是必須進(jìn)行的檢測(cè)項(xiàng)目,在更換不同批次時(shí),為檢測(cè)是否有批間差也必須進(jìn)行;此外,即使是同一個(gè)批次,分次購(gòu)買時(shí),或是存放擱置較長(zhǎng)時(shí)間再次使用時(shí),也需進(jìn)行該項(xiàng)目檢測(cè),以防止培養(yǎng)基在貯存、運(yùn)輸過(guò)程中可能發(fā)生的質(zhì)量變化。

    該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)項(xiàng)目為生物制品廠家控制原材料質(zhì)量提供一定的依據(jù),但是隨著生物制品安全性要求的提高,其所檢內(nèi)容還有待完善,如添加一些諸如動(dòng)物蛋白、抗生素等的檢測(cè),為生物制品廠家控制原材料的安全性提供更高的保障。


    2.3細(xì)胞培養(yǎng)基安全技術(shù)說(shuō)明(MSDS)

    MSDS是化學(xué)品安全技術(shù)說(shuō)明書(shū),是化學(xué)品生產(chǎn)或銷售企業(yè)按法律要求向客戶提供的有關(guān)化學(xué)品特征的一份綜合性法律文件;瘜W(xué)品安全說(shuō)明書(shū)作為傳遞產(chǎn)品安全信息的最基礎(chǔ)的技術(shù)文件,其主要作用體現(xiàn)在:

    1)      提供有關(guān)化學(xué)品的危害信息,保護(hù)化學(xué)產(chǎn)品使用者

    2)      確保安全操作,為制訂危險(xiǎn)化學(xué)品安全操作規(guī)程提供技術(shù)信息

    3)      提供有助于緊急救助和事故應(yīng)急處理的技術(shù)信息

    4)      指導(dǎo)化學(xué)品的安全生產(chǎn)、安全流通和安全使用

    5)      是化學(xué)品登記管理的重要基礎(chǔ)和信息來(lái)源

     

     

    隨著世界各國(guó)對(duì)產(chǎn)品安全和環(huán)境保護(hù)的日益重視,無(wú)論在國(guó)際貿(mào)易還是國(guó)內(nèi)貿(mào)易中,只要企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品涉及到化學(xué)物質(zhì),都必須為客戶提供準(zhǔn)確的MSDS化學(xué)品安全說(shuō)明書(shū)。如果供應(yīng)商提供的MSDS存在錯(cuò)誤或失實(shí),或故意隱瞞有害信息,造成用戶的人員傷亡或環(huán)境污染,用戶往往要求MSDS的提供單位承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。因此,編制MSDS必須符合買方所在國(guó)家和地區(qū)的有關(guān)危險(xiǎn)化學(xué)品的法律法規(guī)。中國(guó)于2000年頒布了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《化學(xué)品安全技術(shù)說(shuō)明書(shū)編寫規(guī)定》(GB16483-2000),用于規(guī)范國(guó)內(nèi)化學(xué)品生產(chǎn)企業(yè)編寫化學(xué)品安全技術(shù)說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容和編寫要求,該內(nèi)容主要包含16項(xiàng):化學(xué)品及企業(yè)標(biāo)識(shí)、成分/組成信息、危險(xiǎn)性概述、急救措施、消防措施、泄露應(yīng)急處理、操作處置與儲(chǔ)存、接觸控制/個(gè)體防護(hù)、理化特性、穩(wěn)定性和反應(yīng)性、毒理學(xué)資料、生態(tài)學(xué)資料、廢棄處置、運(yùn)輸信息、法規(guī)信息、及其他信息(參考文獻(xiàn)、填表時(shí)間、填表部門、數(shù)據(jù)審核單位)等;每項(xiàng)下面有詳細(xì)的說(shuō)明,不同的化學(xué)品制造者據(jù)此結(jié)合產(chǎn)品特性制定相應(yīng)的條款。

     

     

    哺乳類動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基是一種由無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素以及其他有機(jī)化合物按一定比例組成的混合物,在貿(mào)易中屬于化學(xué)品范疇,并且每個(gè)品種中的成份及含量不同,針對(duì)每個(gè)品種都應(yīng)制定相應(yīng)的MSDS說(shuō)明。國(guó)外的生物制藥企業(yè)在對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行質(zhì)量審計(jì)時(shí),都要求生產(chǎn)企業(yè)提供所使用細(xì)胞培養(yǎng)基品種的MSDS,經(jīng)審計(jì)符合對(duì)方法律要求才有資格作為供應(yīng)商。而國(guó)內(nèi)生物制品廠家目前尚未對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基廠家提出該要求。


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